在試驗室的常規ELISA測定中,將板從室溫(通常在25℃擺布)置于37℃溫箱,板也升溫時,在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學梯度。因而運用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地掃除“邊緣效應",而且可進步測定的重復性。
1、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
2、空白孔不加樣,只加顯色劑A,B和終止液用于調零。
3、標準品孔:每孔加入稀釋好的標準品50μl,零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做,并將其作為標曲的后一個點)。
4、樣品孔:加入樣品50μl(推薦直接加樣,濃度高可以用樣品稀釋液稀釋2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養箱中孵育30min。
6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
7、次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
8、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中,輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養箱中孵育30min。
9、第二次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
12、測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
希望上述內容能夠幫助大家更好的了解本產品。